1、划不出单个菌落的原因:
(1)平板上有过多的水分;
(2)划线时接种环未经反复灼烧;
(3)多区划线,三区或四区划线。
2、涂布和倾注的区别:
涂布利于观察,但由于涂布棒上会带有少量的菌液,可能影响计数的准确性;倾注更为准确,但不利于观察菌落的状态。
对霉菌计数来说,涂抹法有以下几方面优越于倾注法:
①培养出的霉菌菌落数较多;
②培养所需的时间较短;
③霉菌孢子、菌落形态特征发育完全,便于鉴定。
这是因为绝大多数霉菌是好氧的,在培养基表面生长快,发育好,而混在培养基中发育就受影响,而且在培养基倾注时霉菌孢子易受热损伤。
3、培养基的选择:
培养基的选择应根据实验材料和检验目的来确定。培养基按微生物的种类可分为细菌培养基、放线菌培养基、酵母菌培养基和霉菌培养基等四类。常用的细菌培养基有营养肉汤和营养琼脂培养基;常用的放线菌培养基为高氏1号培养基;常用的酵母菌培养基有马铃薯蔗糖培养基和麦芽汁培养基;常用的霉菌培养基有马铃薯蔗糖培养基、豆芽汁葡萄糖(或蔗糖)琼脂培养基和察氏培养基等。
4、培养基配制时应注意的问题:
(1)灭菌温度要严格控制,按照要求灭菌,尤其含糖量较高的培养基温度不应太高,过高会导致糖分焦化,影响质量;
(2)琼脂培养基不能反复溶化。反复溶化会破坏培养基中的营养成分;
(3)培养基不能反复灭菌,反复灭菌也会导致营养成分的破坏;
(4)含琼脂的培养基灭菌后,要摇匀。
5、培养温度:
(1)细菌:36-37℃培养
(2)真菌类:25-30℃培养。
6、革兰氏染色方法注意事项:
染色时间的掌握、冲洗的方法。
7、最适计数范围:
细菌计数较为简单,霉菌计数问题比较多见。因为霉菌菌落由孢子和菌丝组成,相当扩散,在直径9cm的平皿里,菌落数稍多就相互交叉重叠,影响计数,但数量太少又会产生较大的误差,因此选择适当的稀释度计数是保证结果准确的关键环节之一。
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